U području suvremenih bioloških i medicinskih istraživanja, in - situ hibridizacija (ISH) analiza se pojavila kao moćna tehnika za vizualizaciju i lokalizaciju specifičnih sekvenci nukleinskih kiselina unutar stanica ili tkiva. Fluorescencijska in - situ hibridizacija (FISH), podvrsta ISH, koristi fluorescentne sonde za vezanje na komplementarne sekvence nukleinske kiseline, omogućujući istraživačima otkrivanje i proučavanje genetskih abnormalnosti, obrazaca ekspresije gena i više. Kao dobavljača fluorescentnih dijapozitivnih skenera, često me pitaju mogu li se naši skeneri učinkovito koristiti za in - situ hibridizacijsku analizu. U ovom blogu ću detaljno istražiti ovo pitanje.
Razumijevanje In - Situ hibridizacijske analize
Analiza hibridizacije in situ proces je u više koraka. Prvo se uzorci tkiva fiksiraju i permeabiliziraju kako bi se omogućio ulazak sondi. Zatim se uzorcima dodaju specifične sonde nukleinske kiseline, koje su obilježene ili radioaktivnim izotopima, fluorescentnim bojama ili drugim markerima. Ove se sonde hibridiziraju sa svojim komplementarnim sekvencama u ciljnim nukleinskim kiselinama. Nakon hibridizacije, nevezane sonde se isperu, a uzorci se vizualiziraju.
Konkretno, FISH nudi nekoliko prednosti. Pruža prostorne informacije visoke rezolucije o položaju sekvenci nukleinskih kiselina unutar stanica i tkiva. Fluorescentni signali mogu se lako otkriti i kvantificirati, a višestruke sonde obilježene različitim fluoroforima mogu se koristiti istovremeno za otkrivanje više ciljnih sekvenci.
Uloga fluorescentnih skenera za stakalca u ISH analizi
Fluorescentni skener slajdova je uređaj koji snima digitalne slike visoke rezolucije fluorescentno označenih slajdova. Koristi kombinaciju optike, izvora svjetlosti i detektora za skeniranje cijelog područja stakalca i generiranje digitalnog prikaza fluorescentnih signala.
Prednosti korištenja fluorescentnih dijapozitivnih skenera za ISH
- Snimanje visoke propusnosti: U mnogim istraživačkim i kliničkim okruženjima potrebno je analizirati velik broj slajdova. Fluorescentni skeneri za slajdove mogu automatski skenirati više slajdova, značajno povećavajući propusnost u usporedbi s ručnom mikroskopijom. Na primjer, u projektu istraživanja raka gdje stotine uzoraka tkiva treba pregledati na specifične preraspodjele gena pomoću FISH-a, skener za slajdove može dovršiti proces snimanja u djeliću vremena koje bi trebalo istraživaču koji koristi tradicionalni fluorescentni mikroskop.
- Dosljedna kvaliteta slike: Ručna mikroskopija može biti podložna varijabilnosti u dobivanju slike zbog razlika u tehnici operatera, kao što su postavke fokusiranja i ekspozicije. S druge strane, fluorescentni skeneri za slajdove programirani su za korištenje dosljednih parametara slike za svaki slajd, osiguravajući da su dobivene slike visoke i ujednačene kvalitete. Ovo je ključno za točnu kvantitativnu analizu fluorescentnih signala u ISH.
- Digitalno arhiviranje i analiza: Nakon što se slajdovi skeniraju, digitalne slike mogu se jednostavno pohraniti, dijeliti i analizirati pomoću specijaliziranog softvera. To omogućuje dugoročno arhiviranje podataka i omogućuje zajedničko istraživanje, jer više istraživača može pristupiti i analizirati iste digitalne slike na daljinu. Na primjer, istraživačka grupa u jednom dijelu svijeta može podijeliti svoje FISH slike sa suradnikom u drugoj zemlji radi drugog mišljenja ili daljnje analize.
Naši fluorescentni skeneri za dijapozitive i njihova prikladnost za ISH
Naša tvrtka nudi niz visokokvalitetnih fluorescentnih slajd skenera, uključujućiDigitalni skener za patologiju GScan - 60,Skener mikroskopskih stakalca, iSkener dijapozitiva svijetlog polja EScan - 1200.
Digitalni patološki skener GScan - 60 dizajniran je za fluorescentno snimanje visoke rezolucije. Ima osjetljivi detektor koji može točno uhvatiti slabe fluorescentne signale, što je čest slučaj u FISH analizi gdje fluorescentne sonde mogu biti prisutne u niskim koncentracijama. Skener također ima visokoprecizni stupanj koji osigurava točno pozicioniranje slajda tijekom skeniranja, smanjujući rizik od artefakata slike.
Skener za mikroskopsko stakalce svestran je instrument koji može rukovati različitim vrstama stakalca i prikladan je za istraživanje i kliničku primjenu. Nudi fleksibilne mogućnosti snimanja, omogućujući korisnicima da prilagode parametre skeniranja prema specifičnim zahtjevima svojih ISH eksperimenata. Na primjer, korisnici mogu odabrati različite razine povećanja i vremena ekspozicije kako bi optimizirali detekciju fluorescentnih signala.
Brightfield Slide Scanner EScan - 1200, iako je prvenstveno dizajniran za snimanje svijetlog polja, u nekim se slučajevima također može koristiti u kombinaciji s fluorescentnim snimanjem. Omogućuje visokokvalitetne slike svijetlog polja koje se mogu koristiti za vizualizaciju ukupne morfologije tkiva, dok se fluorescentna slika može koristiti za otkrivanje specifičnih sekvenci nukleinskih kiselina od interesa.
Razmatranja za korištenje fluorescentnih skenera za stakalca u ISH analizi
Iako fluorescentni slajd skeneri nude mnoge prednosti za ISH analizu, postoje i neka razmatranja koja istraživači moraju imati na umu.
Priprema uzorka
Pravilna priprema uzorka ključna je za uspješnu ISH analizu pomoću skenera za dijapozitive. Uzorke tkiva potrebno je fiksirati i ispravno obraditi kako bi se očuvao integritet nukleinskih kiselina i osigurala dobra hibridizacija sonde. Pretjerana fiksacija ili nepravilna permeabilizacija može dovesti do smanjene dostupnosti sonde i slabijih fluorescentnih signala. Osim toga, slajdovi moraju biti čisti i bez nečistoća kako bi se izbjegle smetnje u procesu skeniranja.
Odabir fluorescentne sonde
Važan je i izbor fluorescentnih sondi. Probe bi trebale imati visoku specifičnost za ciljane sekvence nukleinskih kiselina i trebale bi emitirati snažne i stabilne fluorescentne signale. Različiti fluorofori imaju različite spektre ekscitacije i emisije, a skener za slajdove mora biti kompatibilan s fluoroforima koji se koriste u ISH eksperimentu. Na primjer, ako istraživač koristi sondu označenu daleko crvenim fluoroforom, skener slajdova trebao bi imati izvor svjetlosti i detektor koji može učinkovito pobuditi i otkriti daleko crvenu fluorescenciju.
Analiza slike
Nakon što se dijapozitivi skeniraju, digitalne slike potrebno je analizirati kako bi se izvukle značajne informacije. To često zahtijeva specijalizirani softver za analizu slike. Softver bi trebao moći točno segmentirati fluorescentne signale iz pozadine, kvantificirati intenzitet signala i pružiti statističku analizu ako je potrebno. Neki skeneri dijapozitiva dolaze s ugrađenim softverom za analizu slike, dok drugi mogu zahtijevati korištenje softvera treće strane.
Zaključak
Zaključno, fluorescentni dijapozitivni skeneri mogu se učinkovito koristiti za in situ hibridizacijsku analizu. Oni nude visoku propusnost slika, dosljednu kvalitetu slike i mogućnost digitalnog arhiviranja i analize podataka. Naš asortiman fluorescentnih slajd skenera, uključujućiDigitalni skener za patologiju GScan - 60,Skener mikroskopskih stakalca, iSkener dijapozitiva svijetlog polja EScan - 1200, dobro su prilagođeni za ISH aplikacije.
Ako ste uključeni u in - situ hibridizacijsku analizu i tražite pouzdan fluorescentni slajd skener, potičemo vas da nas kontaktirate za više informacija i kako bismo razgovarali o vašim specifičnim zahtjevima. Naš tim stručnjaka spreman je pomoći vam u odabiru najprikladnijeg skenera za vaše potrebe istraživanja ili klinike te pružiti podršku tijekom cijelog procesa kupnje.
Reference
- Speel, EJ, Hopman, AH i Ramaekers, FC (2001). Protokoli in situ hibridizacije. Springer Science & Business Media.
- Levsky, JM i Singer, RH (2003). Fluorescentna in situ hibridizacija: prošlost, sadašnjost i budućnost. Journal of Cell Science, 116(10), 1995. - 2004.
- Trask, BJ (2002). Ljudska citogenetika: 46 kromosoma, 46 godina i dalje raste. Nature Reviews Genetics, 3(11), 769 - 778.
