Autofluorescencija je čest problem kod snimanja stanica koji može značajno utjecati na kvalitetu i točnost vaših rezultata. Kao vodeći dobavljač sustava za oslikavanje stanica, iz prve ruke sam vidio kako ovo može biti prava glavobolja za istraživače. U ovom blogu podijelit ću s vama kako naši sustavi za snimanje stanica postupaju s autofluorescencijom kako bismo vam osigurali najbolje moguće slike.
Što je autofluorescencija?
Prije nego što zaronimo u to kako se naši sustavi nose s autofluorescencijom, prođimo na brzinu što je to. Autofluorescencija je prirodna emisija svjetlosti bioloških molekula unutar stanica kada su pobuđene svjetlom. To može doći od stvari kao što su NADH, flavini i porfirini. Iako je to normalan dio stanične biologije, može predstavljati problem kod fluorescentnog snimanja jer može stvoriti pozadinski signal koji maskira specifičnu fluorescenciju koju pokušavate detektirati.
Izazovi autofluorescencije u oslikavanju stanica
Autofluorescencija može uzrokovati nekoliko problema u prikazivanju stanica. Prvo, može smanjiti omjer signala i šuma. Kada postoji puno autofluorescencije, postaje teže razlikovati specifični fluorescentni signal od ciljane molekule. To može otežati točnu kvantifikaciju količine vašeg cilja ili vidjeti fine detalje u vašim stanicama.
Drugo, autofluorescencija može varirati ovisno o vrsti stanice, uvjetima rasta, pa čak i starosti stanica. To znači da možete dobiti različite razine autofluorescencije u različitim eksperimentima, što uspoređivanje rezultata čini izazovnim.
Kako se naši sustavi za snimanje stanica bore s autofluorescencijom
1. Napredna tehnologija filtera
Jedan od ključnih načina na koji naši sustavi za snimanje stanica obrađuju autofluorescenciju je kroz naprednu tehnologiju filtera. Naši filtri dizajnirani su za selektivni prijenos valnih duljina svjetlosti koje odgovaraju određenim fluoroforima koje koristite, dok blokiraju valne duljine povezane s autofluorescencijom.
Na primjer, ako koristite zeleni fluorescentni protein (GFP) kao svoj fluorofor, naši će filtri biti optimizirani za propuštanje zelenog svjetla koje emitira GFP dok odbijaju autofluorescenciju koja se javlja u sličnim rasponima valnih duljina. To pomaže smanjiti pozadinski signal i poboljšati kontrast vaših slika.
2. Multispektralno snimanje
Još jedan moćan alat u našem arsenalu je multispektralno snimanje. Uz multispektralno snimanje, naši sustavi mogu snimati slike na više valnih duljina istovremeno. To nam omogućuje da odvojimo signal autofluorescencije od specifičnog signala fluorescencije.
Koristimo sofisticirane algoritme za analizu spektralnih podataka i stvaranje "otiska prsta" autofluorescencije. Zatim možemo oduzeti ovaj autofluorescentni otisak prsta od cjelokupne slike, ostavljajući čistu sliku specifične fluorescencije. Ova tehnika je osobito korisna kada se radi o složenim uzorcima gdje autofluorescencija ima široki spektralni profil.
3. Algoritmi za obradu slike
Naši sustavi za snimanje stanica također dolaze opremljeni naprednim algoritmima za obradu slike koji su posebno dizajnirani za smanjenje autofluorescencije. Ovi algoritmi mogu analizirati sliku piksel po piksel i identificirati područja na kojima je prisutna autofluorescencija.
Nakon što se identificiraju područja autofluorescencije, algoritmi mogu prilagoditi intenzitet piksela kako bi smanjili pozadinski signal. To se može učiniti na način da se očuva cjelovitost specifičnog fluorescentnog signala, tako da ne izgubite važne informacije.
Primjeri iz stvarnog svijeta
Pogledajmo neke primjere iz stvarnog svijeta kako su naši sustavi za oslikavanje stanica pomogli istraživačima u prevladavanju problema autofluorescencije.
Istraživačka skupina proučavala je ekspresiju specifičnog proteina u stanicama raka. Koristili su fluorescentno antitijelo za označavanje proteina, ali dobivali su puno autofluorescencije iz stanica, što je otežavalo uočavanje specifičnog bojenja.
Odlučili su iskoristiti našeLive Cell inteligentni sustav skeniranja. Uz naprednu tehnologiju filtera i algoritme za obradu slike, uspjeli smo značajno smanjiti pozadinu autofluorescencije. Istraživači su tada mogli jasno vidjeti uzorak ekspresije proteina u stanicama raka, što je bio veliki napredak u njihovoj studiji.
Drugi primjer je tim znanstvenika koji je radio na snimanju živih stanica. Pokušavali su pratiti kretanje fluorescentno označene molekule u stvarnom vremenu, ali autofluorescencija iz živih stanica ometala je njihova promatranja.
Prešli su na našeSustav snimanja živih stanica. Mogućnosti multispektralnog oslikavanja sustava omogućile su im odvajanje autofluorescencije od specifične fluorescencije obilježene molekule. To im je omogućilo da točno prate kretanje molekule tijekom vremena, pružajući dragocjene uvide u njezinu funkciju u stanici.
Zaključak
Autofluorescencija je čest izazov u snimanju stanica, ali ne mora biti prepreka. Naši sustavi za oslikavanje stanica dizajnirani su s naprednim tehnologijama i algoritmima za učinkovito rukovanje autofluorescencijom i osiguravaju da dobijete visokokvalitetne, točne slike.
Ako imate problema s autofluorescencijom u svojim eksperimentima snimanja stanica, rado bismo vam pomogli. Naš tim stručnjaka može raditi s vama kako bi pronašli najbolje rješenje za vaše specifične potrebe. Bez obzira jeste li istraživač u akademskoj zajednici ili znanstvenik u industriji, naši sustavi za oslikavanje stanica mogu vam pružiti alate koji su vam potrebni za prevladavanje autofluorescencije i postizanje vaših istraživačkih ciljeva.
Ako ste zainteresirani saznati više o našim sustavima za oslikavanje stanica ili želite razgovarati o mogućoj kupnji, slobodno nas kontaktirajte. Ovdje smo da vas podržimo na svakom koraku.
Reference
- Johnsen, PA, i Remington, SJ (2008). Autofluorescencija u biološkim uzorcima. Journal of microscopy, 230(1), 79-90.
- Murphy, DB (2001). Osnove svjetlosne mikroskopije i elektroničkog snimanja. Wiley-Liss.
